小时候不喜欢过生日,虽然也能收到很多爱和礼物但就是不会发自内心的快乐。家人教我生日是妈妈受难日,再加上我妈生我之后完全放弃了事业,我就一直很愧疚,觉得我是一种累赘。
这几年反而好多了,哪怕没人记得也要记得自己已经走过很长很远的路,已经很厉害很了不起,期待新的一岁继续和生活周旋做自己!
今年生日真的过得很开心。这个世界烂糟糟的,去年经历了特别好也特别坏的亲密关系,特别不顺利的工作发展,但我比以前更加健康有活力,在做真正喜欢的事情,更了解自己,更会照顾自己,也更喜欢自己。总之就是好!非常好!
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有没有做分子的大佬,求助
我最近在做用来同源重组的质粒,到载体和片段连接的部分死活连不上。
插入片段有3个,一开始试着直接连连不上,所以用overlap PCR连成2 kb的一整个片段再和载体连。
载体线性化试了双酶切和反向PCR,6 kb左右(片段分别设计了重叠区域)。
连接方法是takara的infusion和ligation mix,反应完转化感受态,恢复培养后直接涂板。
抗生素浓度从低到高都试了,每次都是新制的板子。
感受态是DH5a,自己制备的(效率没问题)和商品化的也都试过了。是化学转化 。
转化后的板子要么是完全不长菌落,要么是空载…孩子真的要黔驴技穷了,求大佬们救救孩子(´;ω;`)
昨天和人聊到一点钟睡觉。结果前半夜一直浅眠一直醒,三点半愤而爬起关了空调。睡到八点半。很乏的一个人。
图方便我没带框架眼镜,出门只带了一副隐形,觉得连着两天隐形问题不大。早上我就遭报应了,睡不好戴隐形真的不舒服。而且今晚我可能十二点多才能回家。
天坑
发疯
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